外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見(jiàn)聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現了幾種常見(jiàn)的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執行，無(wú)需額外設備，只需用高速離心機進(jìn)行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點(diǎn)是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個(gè)問(wèn)題。此外，分離物中的聚合物可能會(huì )干擾下游分析。外泌體不是干細胞，是干細胞較精華的部分。天津血液DNA外泌體分離哪家好

CHO細胞外泌體的分離和表征：CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過(guò)多種方法來(lái)檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養基中分離外泌體。將細胞培養基以2000×g離心30分鐘以去除細胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過(guò)夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時(shí)，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下，直到需要進(jìn)行后續分析。青島上清外泌體企業(yè)分離樣品前的處理對較終外泌體分離的效果有較大影響。

外泌體衍生物miRNA的重要應用：外泌體保護miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩定，并能被特定受體細胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關(guān)它們來(lái)源的細胞類(lèi)型、靶標和細胞狀態(tài)的身份信息。越來(lái)越多的證據表明，疙瘩細胞來(lái)源的外泌體已成為通過(guò)傳遞病miRNA促進(jìn)疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長(cháng)和轉移至關(guān)重要，因為新血管可以提供額外的氧氣和營(yíng)養物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進(jìn)增殖、血管生成和疙瘩轉移。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì )影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數據，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結構和元素的影響。

外泌體分離方法之篩分分離法:該技術(shù)是通過(guò)膜從生物液體中篩分外泌體并通過(guò)壓力或電泳進(jìn)行過(guò)濾來(lái)分離外泌體。篩分分離法的分離時(shí)間較短，但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點(diǎn)在于分離的外泌體回收率較低。總之，細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領(lǐng)域發(fā)揮著(zhù)重要作用。細胞外泌體分離方法目前多數還是采用高速離心機進(jìn)行離心分離的技術(shù)方法，然而，其他幾種分離技術(shù)，如過(guò)濾法、免疫分離法和篩分法，雖然也能進(jìn)行外泌體分離，但每種方法都有其局限性，多數還是只應用于實(shí)驗室、科學(xué)研究等領(lǐng)域。外泌體通過(guò)它們攜帶的間質(zhì)基質(zhì)組分，在宿主細胞中誘導上皮間質(zhì)轉化等重要的生物學(xué)反應。無(wú)錫上清外泌體企業(yè)

發(fā)現外泌體轉移可能為疾病治著(zhù)和預后提供新的治著(zhù)策略。天津血液DNA外泌體分離哪家好

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過(guò)濾器從細胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過(guò)使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續步驟，以及凝膠過(guò)濾和色譜的較后一步。超濾可以通過(guò)切向流過(guò)濾（TFF）或直流過(guò)濾（DFF）方法進(jìn)行處理。DFF方法也稱(chēng)為死端過(guò)濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問(wèn)題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達30mL的樣品。TFF也稱(chēng)為錯流過(guò)濾是一種更快速、高效和方便的分離大規模外泌體體積的過(guò)程，TFF是樣品流體切向流過(guò)濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過(guò)程。天津血液DNA外泌體分離哪家好

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